[의학,약학]진단분자 생물학 - 유전적 분자형에 따라 혈액형을 구분하는 실험[Molecular Genotyping of the ABO Blood Types] > 마케팅전문가

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[의학,약학]진단분자 생물학 - 유전적 분자형에 따라 혈액형을 구분하는 실험[Molecular Genotyping of the…

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작성일18-04-17 18:06

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A와 B allele는 7군데의 염기에서 차이를 보이며 이 중 아미노산의 변이를 보이는 곳은 nt526, nt796, nt803의 4곳이며 O형은 A allele의 nt261번째의 G염기 결실로 발생한 frame-shift 돌연번이로서 해당 전이효소가 합성되지 못하는 표현형이다. 이런 점 돌연변이는 제한효소가 인지하는 염기서열에 발생하여 제한효소의 인지부위가 새로 생성되거나 또는 현존하는 제한효소 인지부위가 소실되어 제한효소에 의한 DNA의 절편양상이 달라지고 이것은 전기영동을 통하여 쉽게 감지될 수 있는 것이다. 이것은 특政府위의 점 돌연변이(point mutation)에 의해 제한효소로 절단하였을 때 생기는 절편들의 길이가 사람마다 다양하게 나타나는 DNA의 다형성이다.
3.cis-AB형
AB형 중에는 희귀한 혈액형 중 하나인 cis-AB형이 있다아 원래 A형 또는 B형 유전자는 따로 따로 각각 한 쪽 염색체에 위치하는데 cis-AB 유전자는 unequal crossing over에 의해 한 쪽 염색체에 A형과 B형 유전자가 몰려있다아 그래서 A형과 B형 유전자가 통째로 유전된다. cis-AB형인 사람과 O형 사이에서는 AB형 또는 O형이 생길 수 있다아 그리고 cis-AB형인 사람과 유전자형이 …(drop) A/O형인 A형 사이에서는 AB형, A형 또는 O형이 나올 수 있어 가족 간에 혈액형으로 오해가 생길 수도 있다아
4.PCR-RFLP(제한효소 절편 길이 다형성)
RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)는 1980년 Bostein과 그의 동료들이 제한효소의 가계지도를 작성하다가 처음 발견하였다. 사람의 genome 내에서 단일 염기쌍의 변이는 상당히 빈번하여, 일부는 1000bp 중 한번 꼴로 나타난다.

Material & Reagent
구강세포, chelex, 0.9% saline, DW, ABO primers, Tap polymerase, dNTP, 10X PCR buffer, agarose, Nusieve gel, 0.5X TBE buffer, 6X loading dye, EtBr, ice, Restriction enzyme(BstE Ⅱ, Pvu Ⅱ), 원심분리기, 마이크로파이펫, vortex mixer, 온열기, 수조, PCR machine, 전기영동기기, gel documentation system

Procedure

1.chelex 추출법을 이용한 구강세포로부터 DNA 분리
증류수로 입안을 헹군다 → saline 10㎖을 입안에 잠시 머금는다 → 50㎖ 튜브에 saline을 뱉는다 → 4℃에서 1700xg(or 4000 rpm)로 10분간 원심분리 한다 → 상층액은 버린다 →튜브를 얼음에 놓아둔다 → 5% Chelex가 200㎕ 들어있는 1.5㎖ 튜브를 준비한다 → 60㎕ saline으로
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다.
2. ABO 혈핵명의 분자 유전형 타이핑
이 검사법의 특징은 A 및 B allele의 nt803위치에 각각 특이하게 결합하는 A-R primer와 B-R primer를 이용하여 2개종의 allele를 분리 증폭하고, 따로 O allele용 primer set로 실시한 산물과 함께 nt261, nt526, nt 703, nt796위치의 염기서열을 인식하는 제한효소를 처리하여 allele의 type을 알아내는 PCR-RFLP(polymerase chain reaction - restriction fragment length polymorphism)법을 사용한 것이다.실험결과/생물의학
[의학,약학]진단분자 생물학 - 유전적 분자형에 따라 혈액형을 구분하는 실험[Molecular Genotyping of the ABO Blood Types]
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Molecular Genotyping of the ABO Blood Types
Title : Molecular Genotyping of the ABO Blood Types

Introduction
1. ABO 혈액형
ABO 유전자는 9번 염색체 장완(9p34)에 위치하며 모두 7개의 exon을 가지고 있다아 이 유전자는 1065개의 염기로 구성되며 345개 아미노산을 code하며, 그 산물은 UDP-N-acetyl galactose transferase라는 골지체 막효소이다.

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