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단백질의 정량

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작성일18-02-21 20:44

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Ⅱ. 서론
1) 단백질 정량
단백질 정량이란 sample 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생명과학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있따 단백질의 농도를 정량하는 방법에는 UV법, lowry법, BCA법, Bradford법 등이 있따 각각의 단백질 종류에 의한 감도의 차이, 방해물질의 종류와 허용농도 및 반응액의 pH 등에 차이가 있으므로 측정할 대상에 따라 적당한 방법을 선택하여야 한다.


단백질의 정량
Ⅰ. 실험 목적
단백질 정량의 원리를 이해하고, 우유 속 단백질을 정량해본다.
다시 말해 BCA를 이용한 protein 정량은 2 step으로 이루어지는데,


단백질의 정량

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실험결과/기타






단백질의 정량


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설명

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순서
다.
(3) Lowry(Folin-ciocalteau; Folin phenol)법
이 방법은 단백질 사슬의 아미노산에서 구리이온(+2)의 아마이드 결합으로 환원(+1)되는 정도를 측정하는 방법이다.
-단점: 단백질에 따른 변이정도가 있고, 준비과정과 준비시약이 복잡하여 시간이 많이 걸린다(1hr 이상). 시판되는 정량 시약이 방해 물질(계면활성제)에 영향을 받는 경우가 많아 시료 중 방해물질(암모튬설페이트 0.15%이상, glycine 0.5%이상,) 존재하면 단백질 정량에 사용할 수 없다. 흡광계수(ε: 빛이 시료 1cm를 통과할 때의 흡광도)는 단백질시료에 따라 다르므로 원하는 단백질의 흡광 계수값을 알면 시료의 농도측정이 가능하게 된다
-장점(長點): 빠르고, 다른 시약이 필요 없으며, 단백질 시료를 회수하여 그대로 쓸 수 있따
-단점: 자연계에는 280㎚에서 높은 흡광도를 지니는 화합물들이 많이 있고, 핵산과 섞여있는 경우 260㎚에서의 흡광도를 측정해 보정해야 한다는 번거로움도 있따

(2) 뷰렛(Biuret)법
Biuret은 알칼리성 CuSO4와 반응하여 보라색의 착화합물을 만드는데 이와 구조가 비슷한 두개 이상의 펩티드 결합을 가진 화합물도 유사한 착화합물을 만들며 단백질의 경우에는 청자색 또는 적자색의 착화합물을 만든다. 감도가 1㎎/㎖ 정도로 낮은 편이다. 이 착화합물의 양은 단백질의 농도에 따라 달라지기 때문에 각각의 서로 다른 농도를 지니는 표준 단백질 용액을 측정하고자 하는 시료용액도 같은 방법으로 처리한 후, Standard curve로부터 시료의 단백질 량을 …(To be continued ) 측정하는 것이다.
-장점(長點): 모든 단백질에 대해서 재현성이 꽤 좋고 비교적 많은 양(1-20㎎)의 단백질을 정량할 수 있따
-단점: 착화합물의 색은 1-2hr동안은 안정하지만 그 이상의 시간이 경과하면 점점 색도가 증가한다.
(4) BCA(Bicinchoninic Acid)법
이 방법은 단백질이 구리+2가 이온을 구리+1가 이온으로 환원시킬 수 성질을 이용한 Lowry방법을 개선한 것으로 단백질에 의해 환원된 구리+1가 이온이 BCA와 반응하여 보라색의 착화합물을 형성하는 것에 착안 ,단백질의 농도와 보랏빛의 착화합물 형성 정도가 비례함을 562㎚ 파장에서 그 흡광도를 측정함으로 단백질의 양을 측정하는 방법이다.
-장점(長點): 반응의 색이 보다 강하게 나타나므로 감도가 높아 Bradford 보다 더 정확하다고 여겨진다.
2) 단백질 정량방법
(1) UV법
단백질에 있는 티로신, 페닐알라닌 및 트립토판 잔기들은 약 280㎚의 자외선을 흡수하는데 많은 단백질에서 이 아미노산을 합친 수준은 거의 일정하므로 단백질의 농도는 280㎚에서의 흡광도와 비례하게 된다 단백질의 흡광도는 주로 방향족 화합물 잔류물에 기인하는 점에 주목해야한다.5㎍/㎕의 낮은 농도까지 측정할 수 있는 민감한 방법이어서 널리 쓰인다. 이 Lowry 방법에서 사용하는 Folin-Ciocalteau시약에 의한 발색은 뷰렛 시험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성 구리와의 반응과 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판들에 의해서 환원되는 과정에서 단백질의 양에 비례하여 그 착색정도가 커진다. 감도는 0.5㎍/㎖이다.

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